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HCP液质方法
HCP液质方法-详情"宿主细胞蛋白（Host cell protein, HCP）是一类与生物医药制品生产工艺有关的蛋白，会对药品的安全性及药效产生影响。HCP具有潜在的安全风险，作为生物制品中的非目标成分，HCP可能引发机体未知的免疫应答而影响生物制品的功效，甚至引起超敏反应或其他不良反应。因此，通过有效技术手段监控HCP含量是否处于安全区间内就显得尤为重要，以提高生物制品的使用安全性。随着技术的不断改进和升级，液相色谱-质谱联用
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2023-09-18 |
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HCP定量质谱
HCP定量质谱-详情"当前已开发出多种互补的分析用于监测宿主细胞蛋白（HCP），包括1D/2D-PAGE、基于质谱（MS）的分析技术等。如通过二维液质联用（2D-LC-MS）识别潜在的残留HCP，可以开发出基于目标的多反应监测（MRM）-LC-MS的方法来量化原液中的多个HCP。DDA蛋白质组学：采用数据依赖性采集模式（Data Dependent Acquisition，DDA）进行较高浓度的HCP检测，可以鉴定到上千个蛋白，建立数据库，同时可以得到HCP特异性肽段的离子对
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2023-09-18 |
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hcp检测流程
hcp检测流程-详情"宿主细胞蛋白（host cell protein，HCP）是一类异质性的蛋白污染，是生物制品中无法避免的一类杂质，可能在重组发酵过程中产生，或是从外源物质引入。即使进行多次复杂的分离纯化，HCP也可能与产品共同纯化，或随产品而分离，因此需要对原料产品和下游纯化过程（DSP）中间体中的HCP进行表征和量化。在此之前，需要预先对HCP检测流程进行了解与完善，HCP检测流程主要分为以下三大部分。抗体的制备和标准品的制备：
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2023-09-18 |
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HCP覆盖率检测
HCP覆盖率检测-详情"生物技术药物往往是借助工程细胞进行大规模生产，在生产过程中，这些宿主细胞会分泌其他蛋白质，伴随着细胞老化破裂产生的大量胞内蛋白等，形成与产品不相关的杂质，统称为宿主细胞蛋白质（host cell protein，HCP）。HCP的存在可能导致产品不稳定、疗效差等质量风险，还能引发病人的免疫副反应等安全风险。因此，需要证明HCP多克隆抗体能识别HCP的比例，即覆盖率（Coverage），对HCP覆盖率进行检测和评估。覆
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2023-09-18 |
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蛋白纯化pull-down
蛋白纯化pull-down-详情"GST pull-down实验的基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”，然后目的蛋白溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”（目的蛋白），洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析，从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的较纯的目的蛋白。谷胱甘肽S转移酶（GST）是一个含有211个氨基酸的蛋白，通常将该蛋白加入到重组蛋白的N-末端
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2023-09-18 |
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蛋白互作分析Pull-down
蛋白互作分析Pull-down-详情"Pull-down 技术又称蛋白质体外结合实验（Binding assay in vitro）， 是一种行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术，蛋白互作分析Pull-down可用于初步研究两种蛋白质的相互作用分析。Pull-down技术是通过将靶蛋白亲和固定于某种基质上作为“诱饵蛋白”，当细胞抽提液与该基质接触时，与靶蛋白相互作用的配体蛋白被吸附，其他无相互作用的蛋白质则随洗脱液流出。被吸附的配体蛋白则可通过改变洗脱
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2023-09-18 |
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Pull-down,质谱
Pull-down,质谱-详情"质谱是蛋白互相作用研究中的蛋白质“检测器”，一般的质谱技术是不能直接研究蛋白互相作用的，需要和其他技术联用检测（如常见的免疫共沉淀和Pull-down等技术），然后再分析纯蛋白或者复合蛋白样品中存在的具体蛋白，甚至于可以比较不同样本中具体蛋白的相对丰度并寻找差异蛋白。基于质谱的蛋白质检测法与传统的根据分子量鉴定的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳法（SDS-PAGE）以及依靠特异性抗体的蛋白质印
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2023-09-18 |
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Pull-down silver stain
Pull-down silver stain-详情"银染（silver stain）是对聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质进行染色的过程，在碱性条件下，甲醛可以将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，使银颗粒沉积在蛋白带上而染色。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。Pull-down银染（Pull-down silver stain）是将Pull-down样品进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶（SDS-PAGE）电泳分离后进行银染的过程。
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2023-09-18 |
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